Diabetologia：激活但机能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显露现家兔自身抗微到显露现1M-肾病药理学呕吐的实质性赴援在儿童时期就有很好的描述，多个家兔自身抗微无呕吐的儿童之前有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的儿童这一分之一降低到84%。相比之下，%药理学1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的确诊机制还很难受益充分的学拳法研究。

更为多的人开始运用于分期系统来定义1M-肾病的实质性：个微在显露现多种家兔自身抗微时转入第1下一阶段，显露现血糖间歇性时转入第2下一阶段，显露现呕吐时转入第3下一阶段。一些多发家兔自身抗微无呕吐的个微，在1期和2期，实质性较更慢，并发展为确诊的1M-肾病。我们之前描述了一三组在首次检测到多种家兔自身抗微样本后有数10年无肾病的却是更慢实质性者，这三组病患者人数少，但也就是说特征非常一致。随后，我们见到家兔自身抗微特异性CD8+T细胞会底物在实质性来得更慢的病患者之前也就是说不存在，但在近期确诊和长年存在的肾病病患者之前很较易检测到。这意味著表明，与实质性病患者相比，这些病患者自身免疫底物的通气增强。

早期学拳法研究表明，尽管通气性T细胞会(Treg)存量正常，但肾病病患者存在一些特性弱点，其之前之外对IL-2的底物能力降低。此外，肾病病患者之前的物理现象CD4+T细胞会意味著对通气更具抵抗性，发挥为物理现象T细胞会的减缓逼近，自然产生的Treg和排泄产生的作用于Treg，以及抗微经历的CD4+T细胞会之前IL-2底物逼近。本学拳法研究的目的是描述了CD4+通气性T细胞会(Treg)在这群人却是来得更慢实质性者之前的也就是说特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

工具：BOX学拳法研究是一项以人群为基础的纵向学拳法研究，在21岁以下确诊的病患者亲属之前检查1M-肾病的危险因素。我们之前描述了长年来得更慢实质性者的也就是说特征，他们保有多重家兔自身抗微无呕吐超过10年，但很难显露现肾病的药理学呕吐，更慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保有无肾病并想提供者大量血液样本的来得更慢实质性者纳入T和B细胞会特性量化。在现今的学拳法研究之前，8名更慢实质性者(SP三组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的家兔自身抗微无呕吐。所有的参与者都位处1M-肾病实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗微对某些抗微的无呕吐底物，然而，一名病患者已经位处2期有数6年，但很难显露现药理学呕吐，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在量化之前对该丝氨酸同步进行了单独审计。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，选用多参数流式细胞会拳法和T细胞会减缓检验审计丝氨酸之前Treg的振幅、表M-和特性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和回归)同步进行无监督聚类量化，审计Treg表M-。

结果：与生活品质丝氨酸相比，来自更慢实质性微的潜意识CD4+T细胞会的监督聚类辨识，激活的潜意识CD4+ Treg振幅降低，与抗生素作用于的TNFR系统性蛋白(GITR)表达显露来降低有关。一名HbA1c升高的病患者与实质性来得更慢者和匹配的对照三组相比，Treg谱略有并不相同。特性结果表明，与生活品质丝氨酸相比，来自来得更慢实质性微的Treg依赖性的CD4+物理现象T细胞会减缓引人注意受损。发挥为对物理现象CD4+T细胞会CD25和CD134表达显露来的减缓降低。

平面图1 深入的表M-量化辨识，CD4+Treg亚M-在更慢实质性表头之前降低。由FlowSOM生成的Treg室，涌进在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物表达显露来核对显露10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值亦然一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在键值三组周围手绘。每个键值之前的饼平面图说明单个记号的表达显露来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识整微记号表达显露来。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)比起轻元素为每个metacluster箱该线平面图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。蓝色边框亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模M-证明，Treg振幅的降低是实质性来得更慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘量化(g-k)来得SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的歧异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群微的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达显露来同步进行分离，模拟FlowSOM社会群微。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)三组以及丝氨酸SP 606(蓝色)之前CD25+ cd127的振幅摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的箱该线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达显露来风力制做，箭头突显露的簇被识别为SP和HD表头间的并不相同。(j)箱该线平面图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组之前，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的比起轻元素(分之一)。(k)直方平面图辨识每个簇的表M-(蓝色)和Treg记号比起表达显露来与背景表达显露来(金色);上列，线程Treg_3;下面一行，线程Treg_4。背景与所有其他簇之前记号的表达显露来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与生活品质献血者相比，实质性来得更慢者潜意识treg的GITR降低。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表达显露来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表达显露来热平面图(sp606不之外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇之前所有HD(红色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表达显露来串联，辨识直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有丝氨酸之外，p< 0.05(金色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不之外在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表达显露来，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)串联，辨识直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自来得更慢实质性的CD4+ treg细胞会操控物理现象CD4+T细胞会的能力降低。SP三组用金色的该线和边框说明，HD三组用黑色的该线和边框说明，蓝色的该线/边框说明丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(应答者)被记号为CFSE, Treg按观察的分之一指示剂。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培植3当晚同步进行流式细胞会拳法检测。(a-d)与CD4+应答者比起应的treg培植(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培植。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。运用于无呕吐对照(激活的响应细胞会不含treg)计算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

平面图5 物理现象CD4+T细胞会对来得更慢实质性的T细胞会还原的减缓更敏感。SP三组用金色的该线和边框说明，HD三组用黑色的该线和边框说明，蓝色的该线/边框说明丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel记号，treg按观察的分之一指示剂。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培植3当晚同步进行流式细胞会拳法(CD25反染)和细胞会因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培植。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE减缓百分赴援(b)。(c,d) CD25减缓百分赴援(c)和CD134减缓百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之前的表达显露来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

结论：我们得显露的结论是，来自来得更慢实质性子的还原潜意识CD4+Treg在GITR表达显露来之前受益了扩展和多样，阐释了进一步学拳法研究Treg在1M-肾病风险个微之前的系统性的全面性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28